Bezpośrednia diagnoza dystrofii miotonicznej z markerem DNA specyficznym dla choroby

Dystrofia miotoniczna jest autosomalnym dominującym zaburzeniem o częstości 1: 80001. Jego objawy obejmują zanik mięśni, miotonię, zaćmę, upośledzenie umysłowe i wady przewodzenia serca. Mediana wieku pacjentów w momencie wystąpienia objawów wynosi od 20 do 25 lat, chociaż potencjalnie śmiertelna forma przenoszona drogą płciową choroby może wpływać na noworodki. Rozpoznanie tego zaburzenia może być problematyczne ze względu na duże zróżnicowanie zakresu i nasilenia objawów, zarówno w obrębie rodziny, jak i pomiędzy rodzinami. Chociaż defekt biochemiczny leżący u podłoża tego zaburzenia jest nieznany, analiza sprzężeń z wykorzystaniem pobliskich markerów DNA jest dostępna do poradnictwa przedobjawowego i diagnozy prenatalnej. Ten rodzaj diagnostyki genetycznej podlega ograniczeniom, ponieważ polimorfizmy długości fragmentów restrykcyjnych mogą nie mieć charakteru informacyjnego, a zdarzenia rekombinacji mogą wprowadzać w błąd dokładną diagnozę. Badania takie zależą również od dostępności kluczowych członków rodziny Ostatnio opisaliśmy izolację i wstępną charakterystykę komplementarnej sondy DNA, cDNA25, która wykryła polimorfizm w DNA limfocytów z prawidłowej populacji z allelami 8,6 i 9,8 kb (częstotliwości odpowiednio 0,43 i 0,57) 2. Podobne badania przeprowadzone u pacjentów z dystrofią miotoniczną ujawniły, że sonda ta wykryła jeden prawidłowy allel i dystrofię miotoniczną o zróżnicowanym rozmiarze u większości dotkniętych osób. Pasmo zmienne było zawsze większe niż normalny allel 9,8 kb, a jego wielkość dobrze korelowała z nasileniem objawów u osób dotkniętych chorobą. Sonda często wykrywała rozproszoną rozmazę fragmentów DNA odpowiadających allelowi dystrofii miotonicznej, a nie odrębnemu prążkowi, co wskazuje, że rozmiar fragmentu generowanego przez mitozę w tkankach somatycznych może być różny. Wzory dziedziczenia niestabilnego fragmentu odzwierciedlały również zjawisko antycypacji, polegające na tym, że fragment ten powiększa się, gdy jest przekazywany z pokolenia na pokolenie, poprzez mejozę zarówno kobietom, jak i mężczyznom, wraz z towarzyszącym wzrostem nasilenia choroby. Odkrycia te zostały niezależnie zademonstrowane z innymi sondami z regionu3-5. Sekwencjonowanie DNA ujawniło, że zmienność wielkości fragmentu wynika z ekspansji powtarzalnej jednostki zawierającej trzy nukleotydy, cytozynę, tyminę i guaninę (CTG), na końcu 3 genu kodującego członka kinazy białkowej. rodzina5-7. Normalna liczba kopii dla powtarzanej jednostki mieści się w zakresie od 5 do 358. U osób z umiarkowaną depresją miotoniczną liczba ta jest wyższa niż 50 i może wynosić nawet 2000 u poważnie chorych6.
W niniejszym artykule opisujemy zastosowanie p5B1.4, sondy pochodzącej z cDNA25, w analizie genetycznej dotkniętych rodzin. Szczególne odniesienie do pacjentów z trzech różnych rodzin, którzy przedstawili szczególne problemy diagnostyczne, które zostały rozwiązane przy użyciu tej sondy. W jednej z tych dziedzin odziedziczony fragment miotonicznego dystrofii specyficznej zmniejszył się pod względem wielkości po przeniesieniu do chorego potomstwa.
Metody
Pacjenci
Ryc. 1. Ryc. 1. Analiza haplotypów i detekcja mutacji dystrofii miotonicznej w rodowodzie 1. DNA członków rodziny trawionych EcoRI badano za pomocą p5B1.4
[podobne: okulista na nfz warszawa, kiedy nie można oddawać krwi, trombocytoza ]